产品货号：
KD1321
中文名称：
总RNA提取试剂(同Trizol)
英文名称：
Total RNA Extract Reagent
产品规格：
100mL|100mL×10|200mL|200mL×10
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
保存：2～8℃
产品说明：
本产品可以直接从细胞或组织中提取总RNA，它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。裂解后加入氯仿震荡离心，样品分成水相和有机相。RNA存在于水相中。取水相，可以通过异丙醇沉淀，或者通过硅胶模离心吸附柱纯化回收RNA。
产品应用：
通用型试剂，可以用于细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总RNA。细菌和动物组织细胞提取适用性广。部分多糖多酚或者提取困难的植物组织以及血液提取效果差的情况下，建议使用专用植物RNA纯化试剂和血液RNA纯化试剂。
注意事项：
1.本产品含有腐蚀性成分，请佩戴口罩手套操作。如不慎接触，立即用大量清水冲洗。
2.本产品有保护RNA的作用，一般操作可以在室温操作。所用的试剂耗材建议使用RNase-free级别，离心尽可能使用4℃。
使用方法：
一、试剂准备
1.氯仿，异丙醇。
2.75%乙醇(用DEPC水或者超纯水配置)，RNase-free水(可以用超纯水或者DEPC水)。
二、操作步骤
(一)不同样品处理
1.对贴壁细胞(10平方厘米)：吸尽培养液，加入1mL的本产品用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移至干净的1.5mL塑料离心管中。
2.对悬浮细胞(五百万至一千万个)：离心收集细胞，吸尽液体，加入1mL本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中。
3.对新鲜组织(50～100mg)：将新鲜组织剪切成小块，放入10mL或15mL塑料离心管中，加入1mL的本产品，用匀浆器匀浆充分，将匀浆液转移至新的1.5mL塑料离心管中。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织，使用量不要超过30～50mg。(如无匀浆条件，可以将组织液氮研磨之后，加入1mL本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5mL塑料离心管中。
4.可选方案：如匀浆或者研磨之后的裂解液中有很多悬浮或者不溶物(如肌肉，植物块茎等组织)，请将匀浆液于4℃ 10，000rmp离心10min。将上清转移至新的离心管中。
(二)RNA纯化
1.在装有裂解物/匀浆物的1.5mL塑料离心管中加入0.2mL氯仿，震荡混匀。1,2000rmp 4℃离心10min。
2.将上清液转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(粉红色)和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。(可以重复氯仿纯化步骤一次)
3.在上清液中加入等体积的异丙醇，震荡混匀。1,2000rmp 4℃离心10min。
4.小心吸弃上清液，加入1mL 75%乙醇，震荡混匀。4℃ 7500rmp离心5min。
5.短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇。注意不要吸弃RNA沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的后续使用。
6.室温放1～2min晾干沉淀后，加入50～100μL RNase-free水使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。RNA样品可以立即使用或存放于-80℃待用。
(三)RNA检测
1.得到的RNA的质量与操作过程中的多种因素有关。RNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.用分光光度计测定RNA浓度，OD260值为1相当于大约40μg/ml的RNA。
3.RNA的OD260/280比值通常用作核酸纯度的衡量指标，一般情况下，纯RNA的OD260/280比值在1.8～2.1。OD260/280比值会受测定所用溶液的pH值的影响，例如，纯化RNA在pH7.5的10mM Tris缓冲液中OD260/280读数在1.9～2.1之间，而在中性的水溶液中比值会变低，可能只有1.8-2.0，这并不意味着RNA的质量变差。
相关搜索：总RNA提取试剂(同Trizol)，Total RNA Extract Reagent